ئۇلترا بىنەپشە نۇرلۇق مەركەزدىن ياسالغان تۇرۇبىنىڭ ئىشلىتىلىشى ۋە ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى
1) ماس كېلىدىغان ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى تاللاڭ.شۇنىڭغا دىققەت قىلىڭكى ، UF پەردىسىنىڭ ھەر خىل خىمىيىلىك ماددىلارغا بەرداشلىق بېرىش دەرىجىسى ئوخشىمايدۇ.ئادەتتە ، 10 kDa مولېكۇلا ئېغىرلىقتىكى ئۈزۈلۈپ قالغان ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى مولېكۇلا ئېغىرلىق كېسىش ئارقىلىق تاللىغىلى بولىدۇ ، بۇ ئاقسىلنىڭ مولېكۇلا ئېغىرلىقىنىڭ ئۈچتىن بىرىدىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك ، مەسىلەن 35 kDa.ئەگەر قىزىقىدىغان ئاقسىلنىڭ مولېكۇلا ئېغىرلىقى 10 kd ئەتراپىدا بولسا ، مولېكۇلا ئېغىرلىقى 3 KD كېسىلگەن ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى ئىشلەتكىلى بولىدۇ.
(2) يېڭىدىن سېتىۋېلىنغان ئۇلترا بىنەپشە نۇر قۇرغاق ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۇلترا بىنەپشە سۇ قوشۇلۇپ ، سۇ پۈتۈنلەي پەردە ، مۇز مۇنچىسى ياكى توڭلاتقۇدىن ئۆتۈپ بىر نەچچە مىنۇت سوۋۇتۇلغان.ئاندىن سۇ تۆكۈلىدۇ ، يەنى ئاقسىل سۇيۇقلۇقى ۋە قانچىلىك قوشۇلىدۇ ، قايسىسى تۇرۇبىنىڭ ئۈستىدىكى ئاق سىزىقتىن ئېشىپ كەتمەيدۇ.مەشغۇلات يېنىك ، ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى ئاقسىل ئېرىتمىسىنى قوشۇشتىن بۇرۇن مۇز ئۈستىدە ئالدىن ئويلىشىش كېرەك.
3) ماسسىسى ۋە تارتىش كۈچى مەركىزى تەڭپۇڭلۇققا يېتىشى كېرەك.ئايلىنىش سۈرئىتى ۋە تېزلىنىشنىڭ ئۇنچە تېز ئەمەسلىكىگە دىققەت قىلىڭ ، بولمىسا ئۇلترا بىنەپشە نۇرغا بىۋاسىتە زىيان سالىدۇ.مەركەزدىن قېچىش ئۇلترا بىنەپشە نۇر باشلاندى (مەركەزدىن قاچۇرۇش 4 گرادۇسقىچە).ئوخشىمىغان مەركەزدىن ياسالغان RPM g غا ئۆزگەرتىلگەندىن كېيىن ، ئۇ باشقىچە بولدى.سېنترىفۇگنىڭ تېزلىنىشى ئەڭ تۆۋەن چەككە تەڭشەلدى ، پەردىنىڭ بېسىمى تۆۋەنلىدى.دىققەت قىلىڭ ، مەركەزدىن قاچۇرۇش مەنزىلگە يەتكەندىن كېيىن مەركەزدىن ئايرىلىشقا كاپالەتلىك قىلىڭ ، ياكى مەسىلىگە يولۇقسىڭىز ، ئۇنى تۇنجى قېتىم بىر تەرەپ قىلالمايسىز.پەردىنىڭ ئايلانما يۆنىلىشكە بولغان يۆنىلىشى كۆرسەتمە بويىچە تەڭشەلدى (بۇلۇڭلۇق مەركەزدىن قاچۇرۇش قېپى پەردىگە ئوق ئۇدۇلى بولىدۇ).ئەمەلىي ئىشلىتىشتە ، ئادەتتىكى ئايلىنىش سۈرئىتى كۆرسەتمىدىكىگە قارىغاندا تۆۋەن بولىدۇ ، شۇڭا مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىنىڭ ئۆمرىنى ئۇزارتقىلى بولىدۇ.
3) ماسسىسى ۋە تارتىش كۈچى مەركىزى تەڭپۇڭلۇققا يېتىشى كېرەك.ئايلىنىش سۈرئىتى ۋە تېزلىنىشنىڭ ئۇنچە تېز ئەمەسلىكىگە دىققەت قىلىڭ ، بولمىسا ئۇلترا بىنەپشە نۇرغا بىۋاسىتە زىيان سالىدۇ.مەركەزدىن قېچىش ئۇلترا بىنەپشە نۇر باشلاندى (مەركەزدىن قاچۇرۇش 4 گرادۇسقىچە).ئوخشىمىغان مەركەزدىن ياسالغان RPM g غا ئۆزگەرتىلگەندىن كېيىن ، ئۇ باشقىچە بولدى.سېنترىفۇگنىڭ تېزلىنىشى ئەڭ تۆۋەن چەككە تەڭشەلدى ، پەردىنىڭ بېسىمى تۆۋەنلىدى.دىققەت قىلىڭ ، مەركەزدىن قاچۇرۇش مەنزىلگە يەتكەندىن كېيىن مەركەزدىن ئايرىلىشقا كاپالەتلىك قىلىڭ ، ياكى مەسىلىگە يولۇقسىڭىز ، ئۇنى تۇنجى قېتىم بىر تەرەپ قىلالمايسىز.پەردىنىڭ ئايلانما يۆنىلىشكە بولغان يۆنىلىشى كۆرسەتمە بويىچە تەڭشەلدى (بۇلۇڭلۇق مەركەزدىن قاچۇرۇش قېپى پەردىگە ئوق ئۇدۇلى بولىدۇ).ئەمەلىي ئىشلىتىشتە ، ئادەتتىكى ئايلىنىش سۈرئىتى كۆرسەتمىدىكىگە قارىغاندا تۆۋەن بولىدۇ ، شۇڭا مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىنىڭ ئۆمرىنى ئۇزارتقىلى بولىدۇ.
(4) ئېشىپ قالغان 1ml غا مەركەزلەشتۈرگەندە ، 50ul لىق بۇففېر ئېرىتمىسىنى ئېلىڭ ، 10ul لىك ئېقىننى قوشۇڭ ھەمدە كۆك رەڭنىڭ بار-يوقلۇقىنى تەكشۈرۈڭ ، ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ ئاقسىل كەم ياكى ئەمەسلىكىگە ھۆكۈم قىلىڭ.ئەگەر تۇرۇبا ئېقىپ كەتسە ، ئۈستۈنكى قەۋەت ۋە ئېقىننى يېڭى تۇرۇبىغا قۇيۇپ ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى قوزغىتىڭ.تۇرۇبىلارنىڭ يوقاپ كەتكەن-قالمىغانلىقىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، ئېقىشتىن ئىلگىرى BSA نىڭ 5mgml بىلەن 10 مىنۇتلۇق مەركەزدىن قاچۇرۇش ، ئاقسىل يېلىمى ياكى برادفورد خام نېفىتنى ئىشلىتىپ ، قالغان قويۇق ئاقسىل ئېرىتمىسىنى قوشۇش ئارقىلىق داۋاملاشتۇرۇڭ (بۇ مۇز ئۈستىدە ھەرىكەت قىلىدۇ ۋە ئاقسىلنىڭ قىزىپ كېتىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ). قويۇقلۇقىنىڭ ھەممىسى قوشۇلدى.ئەگەر ئاقسىلنىڭ ھۆل-يېغىن يۈز بېرىپ ، نەيچە ئېتىلىپ قېلىشنى كەلتۈرۈپ چىقارسا ، مەركەزدىن قاچۇرۇش جەريانىدا دىققەت قىلىڭ.ئەگەر ھۆل-يېغىن كۆرۈلسە ، ھۆل-يېغىننىڭ كونكرېت سەۋەبىنىڭ ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى ياكى مۇۋاپىق بولمىغان بۇففېر ياكى ئەمەسلىكىنى ئېنىقلاڭ.ئالدىنقىسى كۆپ ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى بىرلا ۋاقىتتا ئۇلترا بىنەپشە نۇر ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ ، قويۇقلۇقى تۆۋەنلەيدۇ ، كېيىنكىسى ئوخشىمىغان بۇففېر ئېرىتمىسىنى ئالماشتۇرۇش ئارقىلىق ئاقسىلنىڭ چۆكۈپ كەتكۈچە ھەل بولىدۇ.
(4) ئېشىپ قالغان 1ml غا مەركەزلەشتۈرگەندە ، 50ul لىق بۇففېر ئېرىتمىسىنى ئېلىڭ ، 10ul لىك ئېقىننى قوشۇڭ ھەمدە كۆك رەڭنىڭ بار-يوقلۇقىنى تەكشۈرۈڭ ، ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ ئاقسىل كەم ياكى ئەمەسلىكىگە ھۆكۈم قىلىڭ.ئەگەر تۇرۇبا ئېقىپ كەتسە ، ئۈستۈنكى قەۋەت ۋە ئېقىننى يېڭى تۇرۇبىغا قۇيۇپ ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى قوزغىتىڭ.تۇرۇبىلارنىڭ يوقاپ كەتكەن-قالمىغانلىقىنى ئېنىقلاش ئۈچۈن ، ئېقىشتىن ئىلگىرى BSA نىڭ 5mgml بىلەن 10 مىنۇتلۇق مەركەزدىن قاچۇرۇش ، ئاقسىل يېلىمى ياكى برادفورد خام نېفىتنى ئىشلىتىپ ، قالغان قويۇق ئاقسىل ئېرىتمىسىنى قوشۇش ئارقىلىق داۋاملاشتۇرۇڭ (بۇ مۇز ئۈستىدە ھەرىكەت قىلىدۇ ۋە ئاقسىلنىڭ قىزىپ كېتىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ). قويۇقلۇقىنىڭ ھەممىسى قوشۇلدى.ئەگەر ئاقسىلنىڭ ھۆل-يېغىن يۈز بېرىپ ، نەيچە ئېتىلىپ قېلىشنى كەلتۈرۈپ چىقارسا ، مەركەزدىن قاچۇرۇش جەريانىدا دىققەت قىلىڭ.ئەگەر ھۆل-يېغىن كۆرۈلسە ، ھۆل-يېغىننىڭ كونكرېت سەۋەبىنىڭ ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى ياكى مۇۋاپىق بولمىغان بۇففېر ياكى ئەمەسلىكىنى ئېنىقلاڭ.ئالدىنقىسى كۆپ ئۇلترا بىنەپشە نۇرنى بىرلا ۋاقىتتا ئۇلترا بىنەپشە نۇر ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ ، قويۇقلۇقى تۆۋەنلەيدۇ ، كېيىنكىسى ئوخشىمىغان بۇففېر ئېرىتمىسىنى ئالماشتۇرۇش ئارقىلىق ئاقسىلنىڭ چۆكۈپ كەتكۈچە ھەل بولىدۇ.
(5) ئاقسىلنى مەركەزلەشتۈرۈش ئۈچۈن ئالدىنقى بىر قانچە باسقۇچ قوللىنىلىدۇ ، ئەگەر بۇففېرنى ئۆزگەرتمەكچى بولسا ، ئاستا-ئاستا يېڭى بۇففېر (0.22um ئۇلترا بىنەپشە پەردىسى ئارقىلىق ئۇلترا بىنەپشە نۇر) نى قوشۇپ ، تەخمىنەن 1ml ئاقسىلغا قوشۇڭ ، ھەمدە ئۈچ مىللىلىتىر ئەتراپىدا 1 مىللىمېتىر ئەتراپىدا قايتا ھاسىل بولىدۇ. ئۇدا نەچچە قېتىم ، ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى ئاخىرقى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقىغا ئاساسەن ، ئادەتتە 500ul دىن ئېشىپ كەتمەيدۇ ، ئەمما 200ul ئىچىدە بولىدۇ.ئۈچ قېتىمدا 1000 × ياكى ئۇنىڭدىنمۇ كۆپ نەتىجىگە ئېرىشىڭ ، ھەر قېتىمدا كەم دېگەندە 10 × ياكى ئۇنىڭدىنمۇ كۆپ مىقداردا موللاش ئارقىلىق ھېسابلىغاندا ، بۇففېرنىڭ ئۆزگىرىشى ئاساسەن.
(5) ئاقسىلنى مەركەزلەشتۈرۈش ئۈچۈن ئالدىنقى بىر قانچە باسقۇچ قوللىنىلىدۇ ، ئەگەر بۇففېرنى ئۆزگەرتمەكچى بولسا ، ئاستا-ئاستا يېڭى بۇففېر (0.22um ئۇلترا بىنەپشە پەردىسى ئارقىلىق ئۇلترا بىنەپشە نۇر) نى قوشۇپ ، تەخمىنەن 1ml ئاقسىلغا قوشۇڭ ، ھەمدە ئۈچ مىللىلىتىر ئەتراپىدا 1 مىللىمېتىر ئەتراپىدا قايتا ھاسىل بولىدۇ. ئۇدا نەچچە قېتىم ، ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى ئاخىرقى ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقىغا ئاساسەن ، ئادەتتە 500ul دىن ئېشىپ كەتمەيدۇ ، ئەمما 200ul ئىچىدە بولىدۇ.ئۈچ قېتىمدا 1000 × ياكى ئۇنىڭدىنمۇ كۆپ نەتىجىگە ئېرىشىڭ ، ھەر قېتىمدا كەم دېگەندە 10 × ياكى ئۇنىڭدىنمۇ كۆپ مىقداردا موللاش ئارقىلىق ھېسابلىغاندا ، بۇففېرنىڭ ئۆزگىرىشى ئاساسەن.
يوللانغان ۋاقتى: 11-نويابىردىن 09-2022-يىلغىچە