PCR تەجرىبىسىدە كۆپ ئىشلىتىلىدىغان بىر قانچە ئېنزىم

پولىمېرازا زەنجىرسىمان ئىنكاسى ، قىسقارتىلىپ قىسقارتىلدىPCRئىنگلىز تىلىدا ، ئالاھىدە DNA پارچىلىرىنى كېڭەيتىشتە ئىشلىتىلىدىغان مولېكۇلا بىئولوگىيە تېخنىكىسى.ئۇنى بەدەن سىرتىدىكى ئالاھىدە DNA كۆپەيتىش دەپ قاراشقا بولىدۇ ، بۇ ئىنتايىن ئاز مىقداردىكى DNA نى زور دەرىجىدە ئاشۇرالايدۇ.پۈتۈن جەريانداPCRئىنكاس جەريانى ، بىر تۈردىكى ماددىلار ئىنتايىن مۇھىم رول ئوينايدۇ.

1. تاق DNA

دەسلەپكى مەزگىلدىكى سىناقلارداPCR، ئالىملار Escherichia coli DNA پولىمېرازا I نى ئىشلەتتى ، ئەمما بۇ خىل ئېنزىمدا مەسىلە بار: ئۇ ھەر قېتىم ئايلىنىش ئېلىپ بېرىلغاندا يېڭى ئېنزىمنى تولۇقلىشى كېرەك ، بۇ مەشغۇلات قەدەم باسقۇچلىرىنى سەل مۇرەككەپلەشتۈرۈۋېتىدۇ ، تولۇق ئاپتوماتىك كۈچەيتىش تەس.ئالىملار 1988-يىلى ئېھتىياتسىزلىقتىن تاق DNA پولىمېراسىنى تېرمۇس سۇ جانلىقلىرىدىن ئايرىۋەتكەندىن كېيىن ھەل قىلىنغان. شۇنىڭدىن كېيىن ، DNA نىڭ ئاپتوماتىك كۈچەيتىلىشى رېئاللىققا ئايلانغان.بۇ ئېنزىمنىڭ بايقىلىشىمۇ شۇنداقPCRتېخنىكا قۇلايلىق ، ئەمەلىي ۋە ئۇنىۋېرسال تېخنىكا.ھازىر ، تاق DNA پولىمېراسى DNA زاپچاسلىرىدا ئەڭ كۆپ ئۇچرايدىغان پولىمېرازا.

2. PfuDNA

يۇقىرىدا دەپ ئۆتكىنىمىزدەك ، Taq DNase نىڭ چوڭ خاتالىقى بار ، شۇڭا ئالىملار ماس كەلمەسلىك سەۋەبىدىن كونكرېت كۈچەيتمەسلىكتىن ساقلىنىش ئۈچۈن ، Taq DNA پولىمېراسىنى بەلگىلىك دەرىجىدە ئۆزگەرتىپ ، سىناق نەتىجىسىنىڭ توغرا بولماسلىقىنى كەلتۈرۈپ چىقاردى.ئەمما تاق DNA پولىمېراسىنىڭ ئۆزگىرىشى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدىكى DNA پولىمېراسىنىڭ پائالىيىتىنى تورمۇزلىيالايدۇ.PfuDNA پولىمېرازا تاق DNA پولىمېراسىنىڭ يۇقارقى كەمچىلىكىنى تولۇقلىيالايدۇ ، بۇنداق بولغاندا PCR ئىنكاسى نورمال ئېلىپ بېرىلسا ، نىشان گېننى كېڭەيتىشنىڭ مۇۋەپپەقىيەت قازىنىش ئۈنۈمى يۇقىرى كۆتۈرۈلىدۇ.

3. تەتۈر كۆچۈرۈلۈش

تەتۈر كۆچۈرۈلگەن نۇسخىسى 1970-يىلى بايقالغان. بۇ ئېنزىم RNA نى قېلىپ قىلىپ ، dNTP نى تارماق بالا قىلىپ ، ئاساسى جۈپلىشىش پرىنسىپىغا ئەمەل قىلىدۇ ھەمدە 5′-3 ′ يۆنىلىشىدە RNA قېلىپىنى تولۇقلايدىغان DNA يەككە بەلۋاغنى بىرىكتۈردى.تەتۈر كۆچۈرۈلۈش ئاساسلىقى DNA ياكى RNA قېلىپىدىكى DNA پولىمېرازا پائالىيىتىگە باغلىق ، شۇڭلاشقا 3′-5 ′ تاشقى پائالىيەت يوق.قانداقلا بولمىسۇن ، ئۇنىڭدا RNase H پائالىيىتى بار ، ئۇ تەتۈر كۆچۈرۈلگەن سىنتېزنىڭ ئۇزۇنلۇقىنى مەلۇم دەرىجىدە چەكلەيدۇ.ياۋا تەتۈر كۆچۈرۈلگەن خاتىرىنىڭ سادىقلىقى ۋە ئىسسىقلىقچانلىقى تۆۋەن بولغاچقا ، ئالىملارمۇ ئۇنى ئۆزگەرتتى.

ForPCRتەجرىبە ، ئاساسلىق ئىستېمال بۇيۇملىرى ： يەككە PCR تۇرۇبىسى ، 4/8 بەلۋاغ PCR تۇرۇبىسى ، PCR تاختىلىرى.

Labio'sPCR ئىستېمال بۇيۇملىرىتۆۋەندىكىلەر بارئارتۇقچىلىقى:

PCR پىلاستىنكىسى: كەڭ ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت مىنىشچانلىقىيۇقىرى سېلىشتۇرما ، ئاسان قۇدۇق پەرقلەندۈرۈشياخشى فلۇئورېسسېنسىيە ئەكىس ئەتتۈرۈش ؛ ياخشىئىسسىقلىق يەتكۈزۈشئىسپاتلانغان DNase ، RNase ، DNA ، PCR چەكلىگۈچ ۋە سىناق قىلىنغان پىروگېنسىز.

يەككە PCR تۇرۇبىسى: پارغا چىداملىق ؛ ياخشىئىسسىقلىق يەتكۈزۈشئەلا ئوپتىكىلىق سۈزۈكلۈك ؛ گۇۋاھنامە بېرىلگەن DNase ، RNase ، DNA ، PCR چەكلىگۈچ ۋە سىناق قىلىنغان پىروگېنسىز.

4/8 بەلۋاغ PCR تۇرۇبىسى: دەرىجىدىن تاشقىرى نېپىز تاملار ؛ سۈزۈكلۈك دەرىجىسى ؛ ياخشى فلۇئورېسسېنسىيە نۇر قايتۇرۇشدورا سانائىتى ، يېمەكلىك سانائىتى ۋە مولېكۇلا بىئولوگىيىسىدە ئىشلىتەلەيدۇ ؛ ئەلا سۈپەتلىك ، قىز PP ماتېرىيالى ؛ گۇۋاھنامە ئالغان DNase ، RNase ، DNA ، PCR چەكلىگۈچ ۋە سىناق قىلىنغان پىروگېنسىز.